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分享程序降溫盒使用注意事項的幾點經(jīng)驗
點擊次數(shù):4774 更新時間:2021-01-19
程序降溫盒采用聚碳酸脂(PC)盒體,藍(lán)色高密度聚乙烯(HDPE)蓋,白色高密度聚乙烯(HDPE)管槽,泡沫襯墊。
可實現(xiàn)每分鐘1℃降溫,大大提高凍存細(xì)胞的存活率,從冰箱拿出來后,泡沫內(nèi)襯及異丙醇也可保證逐步升溫,故也可用于細(xì)胞復(fù)蘇。
用之前在盒夾層內(nèi)注入100%濃度的異丙醇,管槽可放置1-2ml凍存管或儲液管18個,同時管槽支架可防止管子與酒精接觸,以防由于毛細(xì)作用而造成污染,或弄掉標(biāo)簽。
細(xì)胞凍存有兩種方法:傳統(tǒng)的方法是利用冷存管處于4℃、-20℃、-80℃保存,程序降溫方法是利用設(shè)定程序由室溫降低至-80℃,后再放置到液氮槽中長期保存。
程序降溫盒的使用注意事項如下:
經(jīng)驗1:凍存盒外表面有刻度的吧,異丙醇液面要高于底線。
凍存盒肯定是先放在室溫,然后放進(jìn)去細(xì)胞,置于-80,利用異丙醇實現(xiàn)梯度降溫啊。)
根據(jù)論壇里的討論,異丙醇使用過一段時間后是要更換的,但是我一直沒換過,也沒發(fā)現(xiàn)很大問題。
經(jīng)驗2:我們實驗室凍存盒平時放4度,需要凍細(xì)胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉(zhuǎn)移至液氮,貴重的細(xì)胞盡快轉(zhuǎn)移,不然會影響復(fù)蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇。現(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進(jìn)-80的,很方便,效果也不錯的。
經(jīng)驗3:異丙醇的量是要保證的,不能低于表明的線,否則不能起到很好的程序性降溫作用,我們是在4度放置,放了細(xì)胞后立馬放到-80度冰箱,第二天再轉(zhuǎn)移到液氮,效果很不錯。異丙醇熔點:-87.9度的色透明具有乙醇?xì)馕兜目扇夹杂卸疽后w。注意了有可燃性!急性毒性:口服-大鼠LD50:5840毫克/公斤;口服-小鼠LC50:3600毫克/公斤。刺激數(shù)據(jù):眼睛-兔子100毫克/!請注意清理!
經(jīng)驗4:應(yīng)該不可以把凍存盒放4°的,因為梯度降溫的起始點是室溫20°左右,所以從-80℃拿出來的凍存盒應(yīng)該現(xiàn)在室溫靜置一段時間待其恢復(fù)到室溫再使用。而其中的異丙醇應(yīng)使用6~7此后更換一次,而且保證液體量達(dá)到刻度線,否則降溫效果會受到影響。
經(jīng)驗5:凍存盒里的異丙醇一般是250ml,低于刻度了要加上,理論上是5次以后更換異丙醇,但是異丙醇對環(huán)境有害,我們可以多用幾次,只是少了的時候要加滿。還有凍存液里面的DMSO對細(xì)胞有毒性,尤其是室溫的時候,所以凍存盒和凍存液先放4°,等把細(xì)胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里,還放回4°,等到出細(xì)胞間的時候再拿到-80°里面保存。過夜再轉(zhuǎn)入液氮。