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細胞刮刀的實驗步驟你要了解嗎

點擊次數(shù):5964 更新時間:2019-03-07
   細胞刮刀表面是一個新型的細胞培養(yǎng)處理表面,增加了表面濕潤的持久性和細胞吸附的穩(wěn)定性超低吸附板的特征是共價結(jié)合的水凝膠層將細胞吸附、蛋白吸附和細胞的激活降到較低具有凝聚環(huán)的不可逆的蓋減少污染,統(tǒng)一邊角方便堆放帶有字母單孔識別,平底經(jīng)過細胞吸附化處理(標注產(chǎn)品除外)經(jīng)過伽馬射線滅菌,經(jīng)過無熱源認證。
 
  細胞刮刀的刀片是由高分子材料TPE制成,長柄是由高分子材料ABS制成,主要是適用于收獲細胞,其優(yōu)化設(shè)計,確保對細胞損傷,并盡可能接觸細胞生長的所有器皿表面。用于人工收獲細胞,優(yōu)化設(shè)計確保對細胞較小的傷害并盡可能接觸細胞生長的所有表面。細胞刮刀常用于從培養(yǎng)皿中收獲細胞(尤其是干細胞)。
 
  細胞刮刀實驗步驟:無菌條件下取新生小牛大腦皮層灰質(zhì)部,4℃D-Hank′s液洗滌4次,至無血跡殘留。剪成1mm3左右的組織碎塊并置于玻璃勻漿器內(nèi),加入兩倍體積的MEM培養(yǎng)基,勻漿上下20次?勻漿液先用100目(直徑149μm)尼龍網(wǎng)布式漏斗抽濾,培養(yǎng)基洗滌4次,收集濾液。然后用200目(直徑74μm)尼龍網(wǎng)布式漏斗抽濾,MEM培養(yǎng)基洗滌4次。細胞刮刀收集200目尼龍網(wǎng)上的組織(即牛腦微血管),將其置于離心管中,1500r/min離心洗滌10min。離心洗滌的腦微血管懸浮于的0.1%膠原酶中,旋渦振蕩15sec以充分混勻,置于37℃恒溫振蕩水浴箱中振蕩消化50min,取出后旋渦振蕩15sec,1500r/min離心10min,棄上清,用20%BCS的培養(yǎng)基懸浮,接種于明膠鋪被的培養(yǎng)瓶中(培養(yǎng)瓶中加入1%明膠-D-Hank′s液洗滌3ml,37℃孵箱中放置24h,用前倒掉明膠溶液即得明膠覆蓋的培養(yǎng)瓶),置于細胞培養(yǎng)箱中,37℃、5%CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng)。靜置5~7天后,可見少量細胞生長,20%BCS的MEM培養(yǎng)液換液,以后每2~3天換液一次,至細胞長成致密單層后可傳代培養(yǎng)。